信帆生物提供：彗星實(shí)驗(yàn)，單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)檢測(cè)服務(wù)

服務(wù)介紹：彗星實(shí)驗(yàn)（Comet Assay），也稱為單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)（Single Cell Gel Electrophoresis, SCGE），是一種用于檢測(cè)細(xì)胞DNA損傷的分子生物學(xué)技術(shù)。該實(shí)驗(yàn)因其在顯微鏡下觀察到的DNA遷移圖案形似彗星而得名。彗星實(shí)驗(yàn)廣泛應(yīng)用于毒理學(xué)、環(huán)境科學(xué)、放射生物學(xué)和癌癥研究等領(lǐng)域，用于評(píng)估化學(xué)物質(zhì)、輻射或其他因素對(duì)DNA的損傷。
檢測(cè)原理：
當(dāng)細(xì)胞受到外部因素（如輻射、重金屬暴露、化學(xué)物質(zhì)等）影響時(shí)，細(xì)胞內(nèi)的DNA可能出現(xiàn)單鏈或雙鏈斷裂。在中性或堿性條件下，細(xì)胞經(jīng)過裂解、解旋和電泳等步驟后，損傷的DNA斷鏈及片段會(huì)離開核DNA向陽(yáng)極移動(dòng)，形成彗星狀的圖像。DNA受損越嚴(yán)重，產(chǎn)生的斷片越多且片段越小，電泳時(shí)遷移的DNA量也就越大，遷移距離越長(zhǎng)。在熒光顯微鏡下，可以觀察到尾長(zhǎng)增加、尾部熒光強(qiáng)度增強(qiáng)。在一定條件下，DNA遷移距離（彗星尾長(zhǎng)）和DNA含量（熒光強(qiáng)度）分布與DNA損傷程度呈線性相關(guān)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、單細(xì)胞懸液制備：將細(xì)胞調(diào)整為適當(dāng)?shù)臐舛龋糜诤罄m(xù)的制膠步驟。
2、制膠：在載玻片上制備三層膠，第一層為正常熔點(diǎn)瓊脂糖，用于使第二層平整和附著緊密；第二層為含有細(xì)胞的低熔點(diǎn)瓊脂糖，用于固定細(xì)胞；第三層為低熔點(diǎn)瓊脂糖，對(duì)第二層細(xì)胞起保護(hù)作用。
3、細(xì)胞裂解：將載玻片浸入細(xì)胞裂解液中，溶解細(xì)胞膜及核膜，除去蛋白質(zhì)、RNA等，僅存留核骨架。
4、DNA堿解旋：將載玻片置于堿性電泳緩沖液中，使DNA在堿性條件下解螺旋形成單鏈DNA，并使DNA斷鏈在電泳場(chǎng)中易于遷移。
5、單細(xì)胞電泳：在適當(dāng)?shù)碾妷汉碗娏鳁l件下進(jìn)行電泳，使損傷的DNA斷鏈及片段向陽(yáng)極移動(dòng)。
6、中和與染色：電泳完畢后，用中和液處理載玻片，然后用熒光染料（如溴化乙錠）對(duì)DNA進(jìn)行染色。
7、鏡檢和圖像分析：在熒光顯微鏡下觀察并拍照電泳圖譜，利用圖像分析軟件對(duì)彗星圖像進(jìn)行指標(biāo)分析，如彗星全長(zhǎng)、尾長(zhǎng)、尾矩和Olive尾距等。
注意事項(xiàng)：
1、細(xì)胞活性：確保細(xì)胞在處理過程中保持活性，避免人為損傷。
2、實(shí)驗(yàn)條件：嚴(yán)格控制電泳時(shí)間、電壓和緩沖液pH，以確保結(jié)果的可重復(fù)性。
3、數(shù)據(jù)分析：使用標(biāo)準(zhǔn)化軟件分析彗星圖像，避免主觀誤差。
4、對(duì)照設(shè)置：設(shè)置陽(yáng)性和陰性對(duì)照，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。

彗星實(shí)驗(yàn)，單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)檢測(cè)服務(wù) 僅供科研實(shí)驗(yàn)用，不做其他用途！